Resumen del estudio (inglés)
INTRODUCTION: While numerous preclinical models emphasize the therapeutic promise of in vitro-induced Tregs (iTregs) for managing inflammatory diseases and promoting tolerance, their translation to clinical use is limited by concerns over phenotypic and functional instability, largely due to an epigenetic profile distinct from thymic Tregs. METHODS: To address this, we generated and expanded iTregs in the presence of Vitamin C, known to activate TET enzymes that demethylate critical gene regions such as FOXP3. Antigen-specific Tregs were derived from allogeneic co-cultures of monocyte-derived dendritic cells and naïve T cells. After 7 days, allo-Tregs were isolated by FACS and further expanded for 3 weeks with IL-2, TGF-β, rapamycin, with or without Vitamin C supplementation. RESULTS: iTregs treated with Vitamin C displayed heightened FOXP3 expression and sustained high levels of suppressive markers (PD-L1, CD39, TIGIT, and CTLA-4), as well as chemokine receptors linked to allograft homing (CCR4, CCR5, and CXCR3). These cells also demonstrated enhanced allospecific suppression of CD4 + and CD8 + T cell proliferation, even in the presence of pro-inflammatory cytokines. Notably, this proinflammatory milieu did not trigger the production of intracellular cytokines IL-17 and IFN-γ by allo-iTregs, confirming their sustained phenotypic and functional stability. Advanced analysis demonstrated that allo-iTregs possess a unique profile, setting them apart from conventional T cells. Pyrosequencing of the FOXP3 TSDR revealed reduced CpG methylation in Vitamin C-treated iTregs (60.9% at day 21 and 43.5% at day 28) compared to untreated allo-iTregs (85.9% at day 21 and 80.5% at day 28) and naïve T cells (92.8%). In addition, transcriptomic analysis demonstrated that the core Treg transcriptional signature remained largely intact with Vitamin C treatment, irrespective of cytokine exposure, whereas the major transcriptional changes were associated with activation, proliferation, and cell cycle regulation. DISCUSSION: In summary, Vitamin C enhances both the phenotypic and functional stability of allospecific iTregs, even under proinflammatory conditions, correlating with increased TSDR demethylation, while preserving the transcription of key Treg genes. These results suggest that Vitamin C-treated allospecific iTregs are superior candidates for immunotherapy strategies to promote long-term tolerance in transplant recipients. Copyright © 2026 Alvarez-Salazar, Reyes-Barrientos, Cortés-Hernández, Saint-Martin Castellanos, Arteaga-Cruz, Cervera, Martínez-Iturbe, Sánchez-Hernández, Gamboa-Domínguez and Soldevila. DOI: 10.3389/fimmu.2026.1827886 PMCID: PMC13388274
Traducción al español (IA · NME)
ANTECEDENTES: Aunque numerosos modelos preclínicos destacan el potencial terapéutico de los Tregs inducidos in vitro (iTregs) para el manejo de enfermedades inflamatorias y la promoción de la tolerancia, su aplicación clínica se ve limitada por preocupaciones sobre la inestabilidad fenotípica y funcional, en gran medida debido a un perfil epigenético distinto de los Tregs tímicos.
MÉTODOS: Para abordar esto, generamos y expandimos iTregs en presencia de Vitamina C, conocida por activar enzimas TET que desmetilan regiones génicas críticas como FOXP3. Los Tregs específicos de antígeno se derivaron de co-cultivos alogénicos de células dendríticas derivadas de monocitos y células T naïve. Después de 7 días, los allo-Tregs se aislaron mediante FACS y se expandieron durante 3 semanas con IL-2, TGF-β, rapamicina, con o sin suplementación de Vitamina C.
RESULTADOS: Los iTregs tratados con Vitamina C mostraron una mayor expresión de FOXP3 y niveles sostenidos altos de marcadores supresores (PD-L1, CD39, TIGIT y CTLA-4), así como receptores de quimiocinas vinculados a la homing de aloinjertos (CCR4, CCR5 y CXCR3). Estas células también demostraron una supresión aloespecífica mejorada de la proliferación de células T CD4+ y CD8+, incluso en presencia de citocinas proinflamatorias. Notablemente, este entorno proinflamatorio no desencadenó la producción de citocinas intracelulares IL-17 e IFN-γ por los allo-iTregs, confirmando su estabilidad fenotípica y funcional sostenida. Un análisis avanzado demostró que los allo-iTregs poseen un perfil único, diferenciándolos de las células T convencionales. La pirosecuenciación del TSDR de FOXP3 reveló una reducción en la metilación de CpG en iTregs tratados con Vitamina C (60.9% al día 21 y 43.5% al día 28) en comparación con allo-iTregs no tratados (85.9% al día 21 y 80.5% al día 28) y células T naïve (92.8%). Además, el análisis transcriptómico demostró que la firma transcripcional central de Treg permaneció en gran medida intacta con el tratamiento de Vitamina C, independientemente de la exposición a citocinas, mientras que los principales cambios transcripcionales se asociaron con la activación, proliferación y regulación del ciclo celular.
CONCLUSIONES: En resumen, la Vitamina C mejora tanto la estabilidad fenotípica como funcional de los iTregs aloespecíficos, incluso bajo condiciones proinflamatorias, correlacionándose con un aumento en la desmetilación del TSDR, al tiempo que preserva la transcripción de genes clave de Treg. Estos resultados sugieren que los iTregs aloespecíficos tratados con Vitamina C son candidatos superiores para estrategias de inmunoterapia para promover la tolerancia a largo plazo en receptores de trasplantes.
Traducción automática para apoyo de lectura. Para uso clínico recomendamos consultar el texto original publicado.
Detalles bibliográficos
- Autores: Alvarez-Salazar EK, Reyes-Barrientos JE, Cortés-Hernández A, Saint-Martin Castellanos A, Arteaga-Cruz S, Cervera A
- Publicado en: Frontiers in immunology
- PMID: 42488647
- DOI: 10.3389/fimmu.2026.1827886
